尊龙凯时提供的wako质谱级赖氨酰肽链内切酶125-05061为生物医疗研究提供了可靠的工具。以下是该产品的实验准备及操作流程。

一、实验准备

在进行实验之前，确保所有试剂和设备的准备完毕，以保证实验的顺利进行。

二、单位定义

wako质谱级赖氨酰肽链内切酶125-05061的活性单位（酰胺酶单位）定义为在30℃、pH 9.5条件下，每分钟产生1μmol对硝基苯胺所需的酶量。单位计算方式为：

AU/vial = [(a - b) / 25] × (1 / 962) × (40 / 01)

其中，a 为检测样品的吸光度，b 为空白对照的吸光度。

三、实验操作流程

在实验过程中，请遵循以下步骤以确保数据准确性：

1. 使用聚硅酮处理的微量离心管和吸管，以避免蛋白质的吸附。
2. 进行电泳以分离蛋白质样品。
3. 从凝胶中切割出蛋白质片段并放入微量离心管中。
4. 使用凝胶脱色溶液对凝胶进行脱色处理。
5. 向微量离心管中加入300μL乙腈，振荡充分后置于Parafilm膜下。
6. 在Parafilm膜上打孔，通过真空干燥处理15分钟。
7. 准备100μL 10mmol/L DTT溶于100mmol/L碳酸氢铵中，56℃恒温处理1小时。
8. 室温冷却后，加入同等量的50mM碘乙酰胺，避光下恒温45分钟并涡旋。
9. 用100μL 100mmol/L碳酸氢铵洗涤凝胶片段10分钟。
10. 用300μL乙腈干燥凝胶片段15分钟。
11. 用100μL 100mmol/L碳酸氢铵膨胀凝胶片段15分钟。
12. 再次使用300μL乙腈干燥凝胶片段15分钟。
13. 去除液相，进行15分钟的真空干燥。
14. 用100μL赖氨酸内切酶溶液在冰水浴下膨胀凝胶片段45分钟。*
15. 去除赖氨酸内切酶溶液，将凝胶片段置于37℃的50mmol/L Tris-HCl（pH 8.5）中过夜。
16. 向凝胶片段中加入50μL 20mmol/L碳酸氢铵，20分钟内进行3次振荡提取多肽。
17. 加入5%甲酸/50%乙腈，20分钟内提取多肽3次。
18. 如有需要，使用SpeedVac浓缩多肽。
19. 采用ZipTip对多肽进行脱盐和纯化。
20. 如有需要，使用弱真空将多肽浓缩至2μL。
21. 加入基质准备进行质谱分析。

四、购买渠道

尊龙凯时通过北京百奥创新科技有限公司代理，提供wako质谱级赖氨酰肽链内切酶125-05061等相关产品，欢迎咨询与购买！