一、细胞培养条件

细胞名称：人前列腺癌细胞VCAP

生长特性：贴壁

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：DMEM (含 NaHCO3 15g/L) + 10% FBS + 1% P/S

传代方法：第一次建议 1:2 传代

传代情况：2天换液

备注：用无菌离心管收集瓶子培养基，以便进行过渡对比培养。如果对比培养效果不理想，建议直接购买我们的完整培养基。

二、细胞收到后的处理

在细胞进入良好状态后，灌满完整培养液并密封瓶口是运输细胞的最佳方法。收到细胞后，用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后放置于超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后进行操作。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（推荐40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片将作为重要的售后依据。若未提供照片，则默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞未超过80%汇合度时，将培养瓶中的完整培养液收集至离心管中，保持5ml完整培养基并置于37℃、5% CO2孵箱中进行培养。如果细胞密度超过80%，可进行传代培养，具体步骤如下：

弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速返回操作台，轻轻敲击培养瓶后加入5ml以上完整培养基以终止消化。
轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml完整培养基重悬。
按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完整培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培育。

b. 细胞冻存

细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次。
添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置观察细胞，待细胞回缩变圆后加入5ml完整培养液以终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
弃去上清，沉淀细胞后加入1ml的尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。
将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若后期需转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱中存放24小时以上后再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速放入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，通过75%的酒精擦拭冻存管外壁。
将冻存管中的细胞移至含5ml完整培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
弃去上清，沉淀后用5ml完整培养基重悬，接种至T25培养瓶中，放于37℃、5% CO2细胞培养箱内培养。
第二天换用新鲜完整培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞的贴壁性不强，在运输过程中可能发生细胞脱落属正常现象。如脱落较多，应将培养瓶中的所有培养液收集至离心管，1000 RPM离心5分钟，收集上清液进行过渡培养（后期对比培养）。沉淀后加入1-2ml胰酶，轻轻吹打，重悬后消化1-2分钟，再加入5ml完整培养基终止反应。之后进行离心，弃上清，添加1-2ml完整培养基重悬，并按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完整培养基至5-8ml/瓶，最后放置于37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题的重发标准

细胞在运输过程中遭遇多种问题（如丢失、瓶身破损、培养液严重泄漏等）可重发；如细胞污染，需在收到产品48小时内提供真实实验结果以核实后重发；常温发货的细胞或干冰发货的细胞在特定条件下未能存活也可重发；细胞活性问题需在收到产品7天内提供真实实验结果。

2）细胞出现问题不予重发的情况

若因客户原因导致的细胞污染、操作不当、非推荐培养体系或缺乏必要的操作记录，均不予重发。

为确保最高的细胞质量与性能，选择尊龙凯时的产品和服务，享受优质的生物医疗体验。