摘要

本文中展示了2024年9月中检院单抗室新发表在Electrophoresis 和 Journal of Chromatography A 期刊上的两篇文章[1-2]，分别对多个半胱氨酸偶联的抗体-药物偶联物（cysteine-conjugated antibody-drug conjugate, cys-ADC）进行表征，尤其是电荷异质性分析的研究结果。

前言

这两篇文章均以cys-ADC作为研究对象。该类产品是通过一个可裂解的连接子将具有细胞毒性的药物偶联至单克隆抗体上，通过单克隆抗体精准识别靶细胞（通常为癌细胞）后，整个ADC分子被内吞进细胞，随后连接子在胞内裂解，释放出细胞毒性药物，从而实现精准杀灭靶细胞的目的，同时大程度上减小高细胞毒性药物可能给病人带来的副作用。对于本文中所讨论的cys-ADC，在偶联过程中，单抗轻重链间的二硫键被部分还原，暴露出的自由巯基用于小分子药物偶联，轻重链间仅靠非共价力相互结合，因此能够保持分子内非共价相互作用的非变性质谱（native MS）技术被广泛应用在cys-ADC的表征中。

工作亮点

这两篇文章的突出亮点在于成像等电聚焦毛细管电泳（Imaged Capillary Isoelectric Focusing, icIEF）和非变性质谱技术联用对于揭示cys-ADC电荷异质性的重要性。cys-ADC 产品的单抗包含多种翻译后修饰，如糖基化、脱酰胺和氧化等，再加上小分子药物的偶联，使得异质性极高。传统的液质联用技术对其电荷变异体的分离程度有限。而icIEF技术由于分离原理不同，可以从另一个角度对ADC进行大程度上的电荷异质化分离，随后使用基于Orbitrap平台的高灵敏度非变性质谱技术对各个电荷异质峰进行在线完整蛋白分子量测定。

结果与讨论

研究人员首先使用NIST mAb标准品进行了icIEF-native MS方法开发，工作流程涵盖了icIEF及其与质谱的联用。icIEF系统的设计允许高效的分析型和离线馏分处理，与质谱的无缝连接使得分析更加灵活。AEstyle系列二性电解质用于实现超高分辨率的电荷异质体分离，同时对质谱的污染小，从而保证数据的高质量。

在icIEF-native MS的分析中，NIST mAb的电荷异质峰在icIEF层面得到了良好的分离，并通过质谱成功检测。这表明该技术在电荷异质性分析中的有效性。通过对其他cys-ADC样品，如维迪西妥和维泊妥珠进行的分析，结果显示二者的电荷异质峰分布略有差异，这进一步证明了ADC分子的复杂性和深入表征的必要性。

结论

本文所介绍的两篇文章强调了创新型icIEF-native MS技术在cys-ADC电荷异质性分析中的重要贡献。该技术可被广泛应用于具有非共价相互作用分子的电荷异质性分析中，提供全面的完整分子量信息用于组分鉴定。对于有合规需求的客户，变色龙软件的使用可满足客户要求。此外，结合尊龙凯时的产品，客户可获得更高效的实验体验，有助于提升实验室的工作效率。